新中药配方BP10A发挥抗肿瘤作用并且在

大家好，今天推荐一篇年发表在BiomedicinePharmacotherapy上的文章，“AnewherbalformulaBP10AexertedanantitumoreffectandenhancedanticancereffectofirinotecanandoxaliplatininthecoloncancerPDTXmodel”，文章的通讯作者是来自韩国东方医学研究所临床医学部的Ok-SunBang。结直肠癌（CRC）是韩国和美国男性和女性中第三大被诊断的癌症类型。虽然CRC的发病率和死亡率由于诊断、手术技术和抗癌药物的发展而逐年下降，但远期患者的5年生存率仍然很低，为12-14%左右。CRC的治疗以手术和化疗为基础，奥沙利铂是治疗晚期结直肠癌最重要的治疗药物之一。伊立替康（CPT-11）是一种喜树碱衍生物，作为DNA拓扑异构酶抑制剂发挥其细胞毒活性，抑制肿瘤细胞的复制，CPT-11已被用作转移性结直肠癌的关键治疗方案。然而严重的不良反应，如3级或4级迟发性腹泻和中性粒细胞减少限制了它们在临床的使用，即使在化疗引起的毒性风险相对较低的患者中，也观察到严重的副作用，往往会导致化疗的失败。因此，寻找新的化疗药物，以减少不良副作用，同时保持其临床疗效是非常可取的。此外，由于癌症是一种非常复杂的疾病，具有多种调控机制，基于单一靶点机制的抗癌药物可能不如多靶点药物有效。因此，为了克服疗效差的问题，在癌症治疗中经常采用不同药物的联合，以达到协同作用。中药提取物现已用于各种疾病，如PHY是经典方剂黄芩汤基础上研发的用于治疗化疗药物毒性反应的药物，同时还能增强药物的抗癌活性。本文作者使用的BP10A是由两种中药葶苈子和前胡组成，前期作者团队研究证明葶苈子的化学成分能够抑制不同肿瘤细胞系的生长，可以抑制慢性炎症；前胡降气化痰，用于过敏性哮喘，能逆转多药耐药。两种中药虽然有不同的药理活性，但都具有潜在的抗癌活性，因此，有必要选择一个可靠的体内模型系统进行中药混合物的抗肿瘤活性测定。PDTX模型维持了原肿瘤的遗传和组织病理学结构，这种模型是通过将患者活检组织直接移植到免疫缺陷小鼠体内，依靠小鼠提供的微环境进行生长。作为一种典型的模型，PDTX可以克服传统细胞系的一些局限性，能够准确地预测和概括临床试验中看到的反应，并已在许多临床前研究中使用。将10Kg的葶苈子和10Kg的前胡根分别用80%乙醇和70%乙醇在室温下浸渍48h，提取3次，得到粗提液，过滤浓缩干燥后得到.3g葶苈子和2Kg前胡提取物，1:1混合得到BP10A。BP10A和5个对照品[isoquercitrin、isorhamnetin-3-O-β-glucopyranoside、(+)-praeruptorinA、(+)-praeruptorinB和(+)-praeruptorinE]溶解于50%甲醇用于UPLC定量分析，BP10A中5个化合物的含量见表1，BP10A的UPLC-3D紫外光谱见图1。表1.UPLC对BP10A中五种成分的定量分析图1.BP10A的UPLC-3D紫外光谱（图源：BiomedPharmacother原文Figure1）作者考察了BP10A与抗癌药物的体外细胞毒性研究。采用Ez-Cytox法检测HCT-和KM12SM两种不同的人结直肠癌细胞的存活率，当细胞暴露在不同浓度的BP10A（0-μg/ml）48h后，BP10A对HCT-和KM12SM细胞的毒性作用呈剂量依赖性，半数最大有效浓度分别是16.78μg/ml和42.39μg/ml。细胞凋亡相关蛋白PARP的蛋白酶解，是细胞程序死亡的一个早期分子标志，BP10A在两个细胞系中均诱导了PARP的显著降解；凋亡信号通路的关键介质caspase-3、-8和-9，在HCT-细胞中的相对活性也得到了提高，促进细胞凋亡。为了了解BP10A是否会影响细胞周期的进展，作者检测了HCT-和KM12SM细胞系经BP10A处理后的细胞周期分数，BP10A诱导了两种细胞系的G2/M阻滞，G2/M阻滞则表明细胞的有丝分裂被抑制，G2/M期的细胞百分比在HCT-中从21.95%增加到49.73%，在KM12SM中从20.95%增加到27.41%；同时，BP10A显著降低了主要的有丝分裂促进因子cdc2/cdk1和cyclinB1的表达，增加了p21蛋白的表达，P21和P53共同构成细胞周期G1检查站，因DNA损伤后不经过修复则无法通过，减少了受损DNA的复制和积累，从而发挥抑癌作用；与单用奥沙利铂或CPT-11相比，BP10A联合抗肿瘤药物进一步降低HCT-和KM12SM的细胞存活率。这些结果都显示BP10A与广泛应用于CRC治疗的药物具有协同作用，可增强这些药物对CRC的细胞毒性（图2）。图2.BP10A在人结直肠癌细胞系中的细胞毒性作用（图源：BiomedPharmacother原文Figure2）接着，作者考察了BP10A在结肠PDTX模型中的抗肿瘤作用。采用3种不同基因型背景（45F,F,F）的小鼠，根据治疗后每3-4天测得的肿瘤体积，BP10A在3只PDTX小鼠中均表现出显著的、剂量依赖性的肿瘤生长延迟，mg/KgBP10A的剂量时，相较于control组，BP10A组在治疗结束时，肿瘤体积减少约70%（45F）,34%（F）,55%（F）;HE染色组织学评价显示，对照组肿瘤细胞边界清晰，细胞核深染，而BP10A治疗组肿瘤与对照组有显著形态学差异，因为BP10A通过诱导癌细胞凋亡在体外显示出抗肿瘤活性；通过免疫染色将Ki-67蛋白作为细胞增殖标志物和TUNEL法检测细胞凋亡，研究BP10A在移植瘤中对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响，结果显示与对照组相比，BP10A处理显著降低了三种PDTX模型中Ki-67蛋白的表达水平，降幅超过80%；相比之下，TUNEL法检测的异种移植瘤中肿瘤细胞凋亡在BP10A治疗后呈剂量依赖性增加，而对照组仅表现出基础水平的凋亡细胞死亡；因为血管生成在肿瘤的生长、进展和转移中起着重要的作用，为了研究BP10A是否能调节异种移植模型中的血管生成，通过观察血管生成标志物的表达水平，分析PDTX模型肿瘤组织标本中的CD31或泛内皮细胞标志物vWF，CD31免疫荧光染色显示对照组PDTX组织新生血管形成，BP10A治疗可剂量依赖性地降低肿瘤组织中CD31的表达水平，说明BP10A可以抑制肿瘤血管生成的进展（图3）。图3.BP10A对PDTX模型体内肿瘤生长的抑制作用（图源：BiomedPharmacother原文Figure3）最后，作者考察了BP10A联合肿瘤药物在结肠PDTX模型中的抗肿瘤作用。根据治疗后每周两次测量的肿瘤体积，与对照组相比，在研究期间仅使用BP10A或奥沙利铂治疗的肿瘤生长明显下降，与单独使用BP10A或奥沙利铂相比，联合使用BP10A可进一步抑制肿瘤生长。研究结束时对照组平均肿瘤体积比研究开始时增大3.8-15倍，奥沙利铂治疗后肿瘤生长下降约35.9%(45F)、60.5%(F)、31.8%(F)，BP10A(mg/kg)与奥沙利铂联合治疗进一步降低肿瘤体积59.6%(45F)、74.6%(F)，47.1%(F)，说明BP10A与奥沙利铂具有协同抗肿瘤作用；同样，作者也研究了CPT-11单独或联合BP10A治疗的效果，在三种PDTX模型中，CPT-11单独治疗对肿瘤生长的抑制作用低于BP10A或奥沙利铂对肿瘤的抑制作用，在研究结束时，对照组的平均肿瘤体积是开始时的3.5-4.2倍，仅CPT-11治疗组的肿瘤体积分别减少了约24.3%(45F)、41.7%(F)和50.4%(F)，CPT-11与BP10A联合治疗组的肿瘤体积分别减少了约82.9%(45F)、81.8%(F)和74.4%(F)。这些数据表明，在这三种PDTX模型中，BP10A和CPT-11都具有抑制肿瘤生长的强协同作用（图4）。图A和图B中，Ki-67增殖标志物的表达是衡量增殖细胞的数量，大大降低，而凋亡细胞TUNEL染色，单用奥沙利铂或CPT-11不仅显著提高肿瘤组织TUNEL阳性细胞数，而且与BP10A联合应用诱导凋亡的细胞数目更多，这些数据表明BP10A对结肠肿瘤具有抗肿瘤潜力，与奥沙利铂或CPT-11联合使用对结肠异种移植肿瘤CRC细胞凋亡和增殖具有协同作用；CD31免疫荧光染色显示对照组在肿瘤标本中形成了完整血管，而应用奥沙利铂或CPT-11或与BP10A联合应用的CD31阳性区域显著减少，这些结果表明对于CRC，BP10A也与抗癌药物协同抑制血管生成的进展，BP10A可能潜在提高了体内不同抗癌药物的治疗指标（图5）。图4.BP10A、奥沙利铂单独、CPT-11单独及联合奥沙利铂和CPT-11对三种PDTX模型体内肿瘤生长的抑制作用（图源：BiomedPharmacother原文Figure4）图5.BP10A、抗癌药物及其联合应用对肿瘤细胞增殖、TUNEL染色、CD31显示血管生成状态的影响（图源：BiomedPharmacother原文Figure6）总的来说，由两种中药乙醇提取物组成的BP10A可以通过诱导结肠癌细胞凋亡和生长阻滞来诱导细胞毒性，抑制患者源性结肠癌异种移植瘤的肿瘤生长。此外，BP10A与结肠癌常规抗肿瘤药物奥沙利铂或CPT-11具有潜在的协同抑制肿瘤生长作用。因此，BP10A可用于大肠癌患者的中药抗癌药物开发候选物质。预览时标签不可点收录于话题#个上一篇下一篇

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